天能转膜槽，天能转债是哪个公司

膜转移：通过PAGE 电泳分离的蛋白质样品必须通过PAGE 凝胶到膜“转移膜”步骤—— 进行固定，然后才能使用多种方法进行蛋白质印迹检测和显色。在没有电场的情况下，分离的蛋白质条带会扩散，因此应尽快进行转移。在转移膜上显色就像画家在画布上绘画一样；您不仅需要好的画笔和颜料，还需要合适的画布。 Western blotting也是如此，除非选择合适的转印膜，否则无法获得漂亮的结果。因此，在选择合适的转移膜时，转移“膜”的高度应增加1英尺，以免干扰实验。

Western blotting常用的转移膜主要是硝基纤维素印迹膜（NC）和PVDF膜（聚偏二氟乙烯），但尼龙膜和DEAE纤维素膜也用于Western blotting。什么样的膜适合哪种实验？选择主要基于：a.膜对目标蛋白质分子的结合能力（即膜单位面积上对蛋白质的结合能力），以及膜孔径（即， b. 截获的蛋白大小）； b. 不影响后续处理的显色检测（即信噪比良好，适合所选显色方法）； c. 如果后续实验有蛋白等其他要求转印膜，国画选用宣纸，油画选用亚麻或薄棉纽布。与

转移是对Western blot最终结果影响最大的步骤，转移的质量直接影响实验结果的质量。影响膜转移的因素并不多，但主要有三个方面：膜的选择、转移方法和实验操作。首先是膜的选择问题。膜的选择主要根据实验目标和实验要求来考虑。例如，如果您想制备分子量小于20kDa 的小蛋白质，则不建议使用0.45um NC 膜。这是因为蛋白质穿过膜的孔，并且与膜结合的量可能是不确定的。它会影响目标蛋白，从而影响最终结果的可靠性。此外，当需要对分离的蛋白质进行测序时，PVDF 膜是唯一的选择，因为它们是唯一可以承受恶劣洗涤条件的膜。蛋白质印迹常用的膜包括NC 膜、PVDF 膜和尼龙膜，下表总结了它们的一些主要特性。

第二步是选择传输方式。主要有半干膜转印和湿膜转印。半干式操作要求高，但效率也很高。湿式操作要求相对较低且耗时。最后是实验操作的问题。使用PVDF膜时，需要进行预处理。这可能会导致几个问题，例如甲醇润湿不足或膜的某些区域不能很好地与蛋白质结合，从而导致错误。膜上不应有油脂。油脂粘附还会影响蛋白质结合和抗体杂交。

1. 硝化纤维素膜硝化纤维素膜是蛋白质印迹中应用最广泛的转移介质，具有很强的蛋白质结合力，并且兼容包括同位素、化学发光（基于鲁米诺）和常规显色在内的多种显色方法。荧光色、低背景、高信噪比。 NC膜的使用也非常方便，不需要甲醛等预处理，只需浸泡在无离子水中去除膜内的气泡，并在电泳缓冲液中平衡几分钟即可。例如，NC膜易于密封，不需要特殊、严格的清洁条件。转移到NC 膜上的蛋白质在适当的条件下可以长期稳定保存，Schleicher-Schll 的实验表明，一些转移到NC 膜上的蛋白质可以在4C 下保存5 年。即使在治疗后也能保持其免疫识别特性。获得可靠的蛋白质印迹结果。但纯硝化纤维素膜比较脆，容易卷曲，需要小心搬运，且经不起反复“折磨”，不适合需要反复清洗的应用。选择硝酸纤维素膜时，必须注意选择合适的孔径。通常，0.45um 孔径的膜用于超过20KD 的大蛋白质。对于小于20KD，我们建议选择0.2um孔径。 7KD以下，最好选择孔径为0.1um的膜。另请注意，将纯NC 膜—— 与含有醋酸纤维素(CM) 的NC 膜混合会降低粘合强度。另外需要注意的是：NC膜上结合的蛋白质会被一些去污剂取代，所以最好使用温和一点的Tween20进行封闭，浓度不要超过0.3%（据说0.05%是最佳）。

2. 如果您刚开始用PVDF膜制作WB，您可能会有以下疑问：您的实验室老师（或兄弟姐妹）是否有兴趣用PVDF膜制作WB以节省开支？为什么我们总是小心翼翼地偷工减料？当我们教它们的时候？用完后不忍心扔掉边角吗？事实上，这不仅是因为PVDF膜价格较高，还因为PVDF膜是WB的“凶器”。聚偏氟乙烯(PVDF) 膜由Millipore 于1985 年首次推出。与硝酸纤维素膜相比，PVDF 膜在蛋白质截留能力、机械强度和化学相容性方面具有优越的性能（Pluskal 等，1986）。市售硝化纤维素膜的典型结合力为80-100 g/cm2，而PVDF膜的结合力为100-200 g/cm2（PVDF的结合力比硝化纤维素膜强6倍！）。在人类免疫缺陷病毒(HIV) 血清学检测中直接比较PVDF 和硝酸纤维素膜表明，PVDF 膜保留了更多完整的HIV 抗原，并改善了糖基化膜抗原的抗体检测。但这并不是PVDF 膜的唯一大优势：它们的机械强度和耐化学性使它们成为各种染色应用和多重免疫测定的理想选择，并且考马斯等人可以轻松复制单凝胶泳道复制品。目的。进行亮蓝染色、条带切除、N 末端测序、蛋白质消化/肽分离/内部测序和免疫检测（Kurien 等，2003）。即使尼龙和硝化纤维素膜在非常“严酷”的洗涤条件下降解，特别是需要进行N端蛋白质测序时，PVDF膜仍然保持其原有的颜色，使其成为世界一流的产品。因此，PVDF也是蛋白质测序的唯一选择。此外，个人经验表明，一些高度疏水性的蛋白质使用PVDF 膜可以获得更好的结果。适用于PVDF膜的检测方法有很多；化学发光、常规显色、同位素和标准染色都可以，但荧光不行。 PVDF 膜需要特别注意。 PVDF 膜在使用前需要用100% 甲醇进行预处理（15 秒内）并用缓冲液平衡。另外，如果在应用过程中干燥，则应使用PVDF膜进行处理。做同样的步骤（但如果真的出现这个问题，那是你的错。谁不希望你粗心呢？这只是转移前的处理问题。转移后（这可能会影响后续的抗体识别。） PVDF膜也分为0.45um和0.2um，后者孔径更小，对低分子量蛋白质的阻断和吸附效果更好，背景可能比前者略高。

3、尼龙膜尼龙膜主要用于核酸转移，也用于斑点印迹等蛋白质印迹，与NC膜相比，具有结合力强、非常坚固且柔软、不易卷曲等优点。有。机械强度高，操作方便，但具有高背景的缺点—— 尼龙膜具有高电荷密度，这使得密封未键合区域比疏水性NC膜更困难。背景问题在高灵敏度下尤其明显（根据分子克隆III，延长热处理酪蛋白和1% 聚乙烯吡咯烷酮的封闭时间可以改善），并且在SDS 存在下，蛋白质倾向于转移到尼龙膜上。泄漏自转移缓冲液（这种情况可以通过甲醛固定来缓解）。此外，目前还没有适合尼龙膜的直接染色方法。因此，实验室人员往往不选择尼龙膜进行WB实验。尽管如此，有些产品却能“取其精华，去其糟粕”，减少或消除一些不利于尼龙膜Western blotting的因素，使其成为有效的蛋白质转移介质。此类产品的一个例子是Biodyne AB 尼龙转移膜，它是Pierce 公司的子公司，专门生产化学发光底物。这种尼龙膜分为A型和B型两种，制作精良，孔径相同，但又保持了尼龙膜灵敏度高的优点和背景影响大的缺点。为此，Biodyne采用了合适的膜。通过调整信噪比，蛋白结合能力达到200ug/cm2，背景低于大多数尼龙膜和部分NC膜。此外，与A 型相比，B 型Biodyne 的正电荷基团浓度更高，使其成为某些带负电荷蛋白质的理想转移膜。此外，与NC膜相比，Biodyne是一种“更坚固”的转移膜，“不会敲击、撕裂或燃烧（低于200）”。

以下工件可以帮助解决此问题。

同时转移四块凝胶

节省一半时间

效率显着提高

最重要的是安全

性能特点

可同时转印4 块9 x 9 cm 的凝胶转印时间为15 至60 分钟高强度罐体消除液体泄漏风险开放式专用转印架操作方便多重安全设计确保操作安全得到解决。